Infezione da rotavirus

L'infezione da rotavirus o l'influenza intestinale / gastrica è una malattia infettiva con trattamento sintomatico. L'infezione da rotavirus è più comune nei bambini.

L'infezione da rotavirus rappresenta un pericolo particolare per i bambini, dal momento che la maggior parte delle infezioni si verifica in questa particolare popolazione.

Agente causativo dell'infezione da rotavirus

L'infezione è causata da rotavirus - virus della famiglia Reoviridae, che sono simili l'uno all'altro nella composizione antigenica.

Fonte di infezione

La fonte dell'infezione è una persona malata. Il più pericoloso in termini di trasmissione di infezione è il paziente nei primi 3 - 5 giorni di manifestazioni cliniche di infezione da rotavirus, poiché durante questo periodo il contenuto di virus nelle feci escrete è maggiore.

Meccanismo di trasmissione

Il principale meccanismo di trasmissione del virus è fecale-orale, meno spesso - il percorso di propagazione della famiglia di contatto attraverso il trasferimento di rotavirus con oggetti infetti. Particolarmente pericolosi a questo proposito sono i latticini. Le basse temperature di solito non distruggono il virus, quindi conservare il cibo nel frigorifero non impedisce lo sviluppo dell'infezione da rotavirus.

Periodo di infezione da rotavirus epidemico

L'insorgere della malattia si verifica nel periodo autunno-invernale, tuttavia, in altre stagioni, possono anche verificarsi casi di insorgenza della malattia. Di norma, la diffusione e l'insorgenza di sintomi caratteristici dell'infezione da rotavirus è accompagnata dall'emergere di un'epidemia influenzale, pertanto le persone sono infette da rotavirus più comunemente noto come "influenza intestinale".

patogenesi

Dopo essere entrato nel corpo umano, il virus entra nelle cellule della mucosa dell'intestino tenue, che causa la distruzione dei villi dell'intestino. La sintesi di enzimi specifici, così come la violazione della funzione secretoria della mucosa intestinale, porta a diarrea grave e disidratazione del corpo a causa della grande quantità di elettroliti e acqua che entra nel lume intestinale.

Sintomi di infezione da rotavirus:

• congestione nasale;
• mal di gola;
• tosse;
• dolore addominale;
• nausea, vomito, diarrea;
• mal di testa, febbre.

clinica:

I principali periodi di infezione da rotavirus:

• il periodo di incubazione dura 1-2 giorni;
• il periodo acuto dura 3-7 giorni;
• recupero, dura 4-5 giorni.

La malattia è caratterizzata da un esordio acuto, ma è possibile la presenza di un periodo prodromico (circa 2 giorni). Può causare indisposizione, debolezza generale, mal di testa, aumento dell'affaticamento, perdita di appetito, sensazioni spiacevoli e brontolii nello stomaco. Inoltre, lo sviluppo di manifestazioni della malattia da parte del tratto respiratorio superiore è possibile: congestione nasale, mal di gola, tosse facile.

Il quadro clinico complessivo comprende le sindromi di intossicazione, gastroenterite e lesioni del tratto respiratorio superiore

Le manifestazioni della sindrome da gastroenterite comprendono: forte brontolio nell'addome, dolore, soprattutto nella parte superiore dell'addome, nausea, vomito, diarrea. La diarrea con infezione da rotavirus ha una consistenza acquosa schiumosa ed è di colore giallo o verdognolo.

Manifestazioni della sindrome da intossicazione: stanchezza, debolezza, mal di testa. Nei casi più gravi: vertigini, svenimenti.

La sconfitta delle prime vie respiratorie è caratterizzata da naso che cola, congestione nasale, mal di gola, tosse. Zev quando ha un colore rosso brillante.

Complicazioni e mortalità

Le forme gravi della malattia, accompagnate da una grave disidratazione, sono caratterizzate dallo sviluppo di insufficienza cardiovascolare, anche mortale (nel 2-3% dei casi). Dopo l'infezione, si produce un'immunità instabile, che si indebolisce nel tempo, quindi è possibile una re-infezione.

Diagnosi di infezione da rotavirus

La diagnosi dell'infezione da rotavirus è possibile solo quando viene rilevato rotavirus negli esseri umani utilizzando metodi diagnostici di laboratorio come PCR - reazione a catena della polimerasi, RPHA - reazione di emoagglutinazione passiva, legame del complemento CSC, immunofluorescenza e molti altri.

La conta ematica completa mostrerà la leucocitosi con uno spostamento sinistro neutrofilo, un aumento della VES - nel periodo acuto. Per il periodo di recupero è caratterizzato da normalizzazione del quadro ematico. L'analisi delle urine mostrerà proteine, leucociti e globuli rossi, i cilindri ialini in piccole quantità.

Infezione da rotavirus - trattamento dell'influenza intestinale in adulti e bambini

Il trattamento è sintomatico, in quanto non esistono farmaci antirotavirali specifici per combattere il rotavirus.

Principi di trattamento dell'infezione da rotavirus:

1. Isolamento di un paziente con infezione da rotavirus
2. Combatti contro la disidratazione. È auspicabile utilizzare soluzioni saline speciali per questo, ad esempio, rehydron, salino. Sono utilizzati nel trattamento del paziente in ospedale, ma la soluzione salina per ripristinare il normale stato acido-base del corpo può essere preparata a casa: 1 cucchiaino da tè a 1 litro di acqua. Si raccomanda di bere molta acqua minerale.
3. La lotta contro la temperatura deve iniziare a una temperatura di 38, 5 e oltre. Allo stesso tempo, a seconda del tipo di febbre, è necessario utilizzare metodi fisici per ridurre la temperatura, ad esempio, strofinando il corpo con acqua e sostanze chimiche - prendendo farmaci specifici, nei bambini è meglio usare le candele.
4. Accettazione di preparati enzimatici, agenti adsorbenti e astringenti (carbone attivo, polisorbito), preparati batterici lattici.
5. E 'vietato prendere antidolorifici per il dolore nell'addome.

Indicazioni per il rinvio in ospedale per l'infezione da rotavirus:

• deterioramento progressivo, diarrea prolungata;
• l'emergere di nuovi sintomi.

Dieta per l'infezione da rotavirus:

La dieta include evitare latte e latticini, compresi i latticini. Si consiglia di includere nella dieta brodo di pollo o porridge di riso, fatto bollire in acqua senza aggiungere olio. È necessario mangiare in piccole porzioni con pause. Si raccomanda di limitare l'assunzione di cibo ricco di carboidrati.

Prevenzione dell'infezione da rotavirus

Le principali misure preventive per l'infezione da rotavirus includono:

• Prevenire l'ingresso del virus nell'organismo, tra cui l'isolamento dei malati, il lavaggio regolare delle mani, l'assunzione di prodotti di alta qualità e provati, l'utilizzo di acqua distillata, il lavaggio di verdure e frutta;
• controllo sanitario di strutture di ristorazione e prodotti nei negozi, mercati.

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Infezione da rotavirus

L'infezione da rotavirus (gastroenterite da rotavirus) è una malattia infettiva acuta causata da rotavirus, caratterizzata da sintomi di intossicazione generale e danni al tratto gastrointestinale con sviluppo di gastroenterite.

Codice ICD-10
A08.0. Enterite da rotavirus.

Eziologia (cause) di infezione da rotavirus

L'agente eziologico è un membro della famiglia Reoviridae, un genere di Rotavirus (rotavirus). Il nome si basa sulla somiglianza morfologica dei rotavirus con una ruota (dal latino "rota" - "wheel"). Sotto un microscopio elettronico, le particelle virali sembrano ruote con un ampio mozzo, raggi corti e un bordo sottile chiaramente definito. Un virione di rotavirus con un diametro di 65-75 nm è costituito da un centro denso di elettroni (nucleo) e due gusci di peptidi: un capside esterno e uno interno. Il nucleo di 38-40 nm contiene proteine ​​interne e materiale genetico rappresentato da RNA a doppio filamento. Il genoma dei rotavirus negli umani e negli animali consiste di 11 frammenti, che è probabilmente la ragione della diversità antigenica dei rotavirus. La replicazione dei rotavirus nel corpo umano avviene esclusivamente nelle cellule epiteliali dell'intestino tenue.

Infezione da rotavirus, vista al microscopio elettronico

Quattro antigeni principali sono stati trovati nel rotavirus; il principale è l'antigene di gruppo, la proteina del capside interno. Prendendo in considerazione tutti gli antigeni specifici del gruppo, i rotavirus sono divisi in sette gruppi: A, B, C, D, E, F, G. La maggior parte dei rotavirus umani e animali appartengono al gruppo A, all'interno del quale si distinguono sottogruppi (I e II) e sierotipi. Il sottogruppo II comprende fino al 70-80% dei ceppi isolati dai pazienti. Esistono prove di una possibile correlazione di alcuni sierotipi con la gravità della diarrea.

I rotavirus sono resistenti ai fattori ambientali: nell'acqua potabile, nei corpi idrici aperti e nelle acque reflue, persistono fino a diversi mesi, per le verdure - 25-30 giorni, per il cotone, per la lana - fino a 15-45 giorni. I rotavirus non vengono distrutti dal congelamento ripetuto, sotto l'azione di soluzioni disinfettanti, etere, cloroformio, ultrasuoni, ma muoiono quando vengono bolliti, trattati con soluzioni con un pH superiore a 10 o inferiore a 2. Condizioni ottimali per i virus: temperatura 4 ° С e alta (> 90%) o basso (Autore: Malattie infettive: leadership nazionale, a cura di ND Yuschuk, Yu. Ya. Vengerov. 2009

La diagnosi di infezione da rotavirus

io sostengo
Capo delegato
Capo epidemiologico
Dipartimento del Ministero della Salute dell'URSS
G.G.ONISCHENKO

7 marzo 1989 N 15-6 / 6

Infezione da rotavirus

(RACCOMANDAZIONI METODICHE)

Istituto di Poliomielite e Encefalite virale, Accademia delle scienze mediche dell'URSS.

Istituto di ricerca di epidemiologia del Ministero della Sanità dell'URSS;

Istituto di ricerca di epidemiologia e microbiologia. GN Gabrievskogo Ministry of Health della RSFSR;

Associazione di produzione scientifica "Rostepidkompleks";

Istituto di ricerca scientifica di tutti i paesi dell'Unione per la disinfezione e la sterilizzazione del Ministero della Sanità dell'URSS.

Le linee guida sono destinate a professionisti e ricercatori delle autorità e istituzioni sanitarie.

Il rotavirus umano appartiene ad un gruppo di virus animali simili tra loro, che, in aggiunta ad esso, include il virus della diarrea del vitello del Nebraska (NCDV), il virus della diarrea epizootica di giovani topi (EDJM), il virus della scimmia (SA-II), il virus proveniente dal contenuto intestinale di pecora e bovini (0), così come i patogeni di diarrea maiali, puledri, cuccioli e altri animali. Tutti questi virus hanno le stesse dimensioni e forma e sono vicini l'uno all'altro in termini antigenici.

Gli animali Rotavirus si riproducono bene nella coltura tissutale, pertanto, sono stati isolati e studiati prima del rotavirus umano. Rotavirus di vitelli e scimmie, a causa della loro vicinanza antigenica al rotavirus umano, sono stati utilizzati per stabilire il suo ruolo eziologico nella gastroenterite acuta e sono stati utilizzati fino ad oggi nella loro diagnostica sierologica e per ottenere immunoreagenti.

Il rotavirus umano è stato rilevato mediante microscopia elettronica in cellule epiteliali duodenali e in estratti di feci di pazienti tipici, dove è spesso contenuto in concentrazioni molto significative (fino a 10 particelle in 1,0 g di feci). Il virione del rotavirus è una particella sferica a due capi (cioè rivestita con una guaina proteica a due strati) con un diametro di 70 - 75 nm, contiene acido ribonucleico - RNA (11 segmenti a doppio filamento), ha una densità fluttuante in cloruro di cesio di 1,36 g / cu. cm con coefficiente di sedimentazione 500 - 530 S

Secondo le caratteristiche disponibili, il rotavirus umano, insieme ai virus animali sopra elencati, è stato classificato come un genere Rotavirus della famiglia Reoviridae. Il nome "rotavirus" deriva dalla rota latina - una ruota che una particella di un virus assomiglia a preparazioni al microscopio elettronico.

Secondo la specificità dell'antigene, rilevata dall'ELISA, i rotavirus sono divisi in due sottogruppi (denotati con numeri romani - I e II) e per specificità, rilevati nella reazione di neutralizzazione, da 4 (e possibilmente più) sierotipi (indicati con numeri arabi - 1 2, 3, 4). La specificità sottogruppo di alcuni rotavirus è determinata dalla principale proteina del capside interno e la loro specificità sierotipica è determinata dalla glicoproteina del capside esterno. Recentemente sono stati scoperti Rotavirus di un nuovo tipo (i cosiddetti pararotavirus) che non hanno un antigene specifico del gruppo.

L'infezione da rotavirus è molto diffusa. Informazioni sulla sua identificazione sono state pubblicate in Australia, Gran Bretagna, Repubblica Democratica Tedesca, Canada, India, Spagna, Stati Uniti, Francia, Giappone e molti altri paesi. Nell'Unione Sovietica, le malattie della gastroenterite da rotavirus sono state registrate tra bambini e adulti in numerose regioni della RSFSR, Transcaucasia, Ucraina, Stati baltici, Asia centrale e altri territori. Tra i bambini e gli adulti, l'infezione da rotavirus può manifestarsi sotto forma di casi sporadici, malattie del gruppo locale e focolai di massa con copertura di vari gruppi di popolazione su vaste aree. Tra i pazienti ospedalizzati con infezioni intestinali acute, la proporzione di adulti con gastroenterite da rotavirus è in media del 10-15%, bambini del 15-27% o più. I dati della letteratura sull'isolamento del rotavirus (antigene) in bambini sani e adulti sono molto contraddittori: dallo 0-0,5 al 42% nei bambini e dallo 0% al 7% o più negli adulti. L'infezione da rotavirus è registrata durante tutto l'anno. Tuttavia, oltre il 70% dei pazienti viene rilevato durante la stagione fredda. Nel periodo invernale-primaverile, la maggior parte delle epidemie di infezione da rotavirus tra la popolazione, così come le malattie di gruppo tra neonati e bambini prematuri, i bambini di gruppi organizzati, gli anziani, sono anche registrati. Non ci sono state differenze marcate nella distribuzione delle infezioni da rotavirus (sia bambini che adulti) per genere.

La fonte dell'infezione nelle infezioni intestinali acute dell'etiologia del rotavirus è costituita da adulti e bambini infetti - pazienti con una forma manifesta di infezione o rotavirus secernenti asintomatici con feci. Allo stesso tempo, i bambini del primo anno di vita sono spesso infetti da madri infette da rotavirus, e bambini più grandi e adulti da bambini di gruppi di bambini organizzati. L'infezione dell'uomo dagli animali non è provata, sebbene non ne sia esclusa la possibilità. Attualmente, rotavirus di diversi sierotipi si trovano negli escrementi di quasi 50 specie di animali e uccelli con segni pronunciati di diarrea e senza di essi.

I rotavirus in pazienti e persone senza manifestazioni cliniche della malattia sono attualmente presenti solo nelle feci. I pazienti secernono rotavirus nell'ambiente, a partire dal primo giorno di malattia, mentre in tutti i pazienti è stata rilevata la massima quantità di patogeno nelle feci (fino a 10 - 10 particelle virali per 1 g) durante i primi cinque giorni della malattia, che determina il maggior rischio epidemiologico di pazienti verso gli altri questo periodo di malattia. Nei prossimi 6-10 giorni, il rilascio di rotavirus con le feci dei pazienti diminuisce bruscamente quando le feci si normalizzano. La durata media dell'escrezione di rotavirus da parte dei pazienti è di 7-8 giorni, ma in alcuni pazienti questo periodo può durare fino a 20-30 giorni. Le persone senza manifestazioni cliniche della malattia possono rilasciare a lungo termine rotavirus con feci fino a diversi mesi o più (periodo di osservazione).

Il principale meccanismo di trasmissione dei rotavirus è fecale-orale, che si realizza attraverso vie di trasmissione idrica, alimentare e domestica. In caso di malattie sporadiche e locali del gruppo, l'infezione da rotavirus si verifica prevalentemente con mezzi domestici. Ciò contribuisce a una dose patogenica molto bassa di rotavirus (entro 10 particelle virali). È stato stabilito che in vari siti ambientali, i rotavirus mantengono la vitalità da 10-15 giorni (a seconda della temperatura e dell'umidità) a un mese; nelle feci da diverse settimane a sette mesi.

Attualmente, le epidemie di acqua e cibo causate dall'infezione da rotavirus sono registrate nel nostro paese e all'estero. I rotavirus si trovano nell'acqua di fiumi, laghi, mari, acque sotterranee, acqua di rubinetto, determinati prodotti alimentari (latte, ecc.).

La possibilità di implementazione in alcuni casi di gocciolamento, polvere e altri percorsi del rotavirus è presumibile.

I rotavirus sono anche conosciuti come uno dei principali agenti eziologici nei focolai nosocomiali (nosocomiali) della gastroenterite acuta. Negli ospedali di diversi profili, fino al 50-60% dei bambini ammalati può essere infettato. Ci sono casi di focolai in case di maternità. Spesso colpisce i bambini che si nutrono artificialmente, soffrono di malattie acute e croniche, con vari tipi di immunodeficienza.

Immunità alla suscettibilità. Le persone di tutte le età sono suscettibili al rotavirus. La massima suscettibilità si osserva nei bambini di 6 mesi. fino a 2 anni. Gli anticorpi anti-rotavirus sono rilevati nel 50-60% dei bambini nel primo anno di vita, all'età di oltre 3 anni - più del 90% e in quasi tutti gli adulti. Tuttavia, secondo la letteratura, la presenza di anticorpi nel siero indica fondamentalmente solo un incontro del corpo umano con rotavirus, e non la presenza di immunità, poiché anche con un livello significativo di anticorpi umorali, sono possibili malattie ripetute. L'immunità con l'infezione da rotavirus non è completamente compresa. Si ritiene che la resistenza alle infezioni sia dovuta principalmente all'immunità locale delle piccole cellule dell'epitelio intestinale, che è associata alla presenza di anticorpi secretori della classe IgA. Questi anticorpi si trovano anche nel latte di una madre che allatta e, apparentemente, servono come fattore nella immunizzazione passiva dei neonati, che, in assenza di manifestazioni cliniche della malattia con le feci, possono rilasciare quantità significative di rotavirus nell'ambiente e infettare neonati prematuri e bambini con uno sfondo premorboso sfavorevole. I rotavirus di diversi sierotipi non creano un'immunità crociata e pertanto lo stesso bambino o adulto può avere malattie ripetute a causa di altri sierotipi del virus. La natura instabile dell'immunità nei pazienti con gastroenterite da rotavirus è anche nota, le malattie ripetute sono spesso registrate 1-1,5 anni dopo l'infezione.

Caratteristiche del processo epidemico con infezione da rotavirus:

- l'ubiquità della distribuzione territoriale;

- rigida stagionalità invernale o invernale-primaverile;

- bassa dose infettiva dell'agente patogeno e alti foci nei gruppi organizzati;

- danno a persone di tutte le età;

- un'alta percentuale di casi tra i bambini sotto i 2 anni di età con la massima individuazione di malattie tra i bambini nella seconda metà della vita;

- alta attività dell'acqua e vie di trasmissione domestiche;

- località di focolai domestici, per lo più limitati alla famiglia;

- la possibilità di isolamento asintomatico di rotavirus tra bambini e adulti;

- la possibilità di infezione nosocomiale con la partecipazione di personale medico e genitori di bambini malati.

Il quadro clinico dell'infezione da rotavirus ha molto in comune con le manifestazioni cliniche delle malattie intestinali acute di diversa eziologia, il che rende difficile diagnosticare questa malattia. Tuttavia, ci sono una serie di differenze caratteristiche che consentono di sospettare tempestivamente questa malattia e di attuare correttamente misure antiepidemiche e terapeutiche.

Il periodo di incubazione è breve e dura da 15 ore a 3 - 5 giorni, ma più spesso - 1 - 3 giorni.

La maggior parte dei pazienti ha un esordio acuto della malattia, quando l'intero complesso dei sintomi si sviluppa durante i primi giorni della malattia. Nei bambini piccoli, è possibile l'insorgenza subacuta, caratterizzata dall'apparizione nei primi giorni della malattia di 1 o 2 sintomi e dall'aggiunta del resto da 2 a 3 giorni di malattia. Il più patognomonico per l'infezione da rotavirus è il danno al tratto gastrointestinale, che nel 60-70% dei pazienti è combinato con lo sviluppo di sintomi di danno del tratto respiratorio. A volte i sintomi catarrale possono precedere 3-4 giorni di disfunzione intestinale. La sindrome respiratoria è caratterizzata da iperemia moderata e granularità della faringe, palato molle e archi palatali, congestione nasale, tosse, che, a differenza di ARVI, sono meno pronunciati, non hanno tendenza ad aumentare e sono di breve durata (4 - 5 giorni). La diarrea si verifica nel 95-97% dei pazienti. Per l'infezione da rotavirus è caratterizzata dallo sviluppo di gastroenterite, meno enterite. La sedia è solitamente liquida, acquosa, schiumosa, poco colorata, senza impurità o con una piccola quantità di muco. Nei bambini piccoli prevale la diarrea acquosa, che spiega lo sviluppo più frequente di exsicosi in questa fascia di età. La frequenza delle feci in media non supera da 4 a 5 volte al giorno, ma può raggiungere da 15 a 20 volte nei bambini più piccoli. La durata della diarrea negli adulti e nei bambini più grandi è di 3 - 7 giorni, nei bambini spesso dura fino a 10 - 14 giorni. Il vomito è un sintomo cardinale ed è notato nell'80% dei pazienti con infezione da rotavirus. Più spesso, si verifica contemporaneamente con la diarrea o la precede. Il vomito è spesso ripetuto, ma a breve termine (1 - 2 giorni). Il vomito ripetuto e incontrollabile per questa infezione non è tipico e spesso indica un'infezione mista. La temperatura, di regola, non supera 38.5 - 39 ° C e è normalizzata da 3-4 giorni di malattia. I segni più tipici di intossicazione generale sono debolezza, letargia, debolezza, mal di testa, vertigini. La gravità della malattia è determinata dallo sviluppo dell'isicosi isotonica, I - II grado, meno spesso III grado, che è più comune nei bambini. Allo stesso tempo, le perdite di elettrolito (Na e K) sono piccole, che devono essere prese in considerazione quando si esegue la terapia di reidratazione.

4. Diagnosi e diagnosi differenziale

Un esame obiettivo nei pazienti ha rilevato letargia, iperemia congiuntivale e iniezione vascolare della sclera. Linguetta moderatamente rivestita, asciutta. L'addome è morbido, moderatamente doloroso alla palpazione nell'area dell'intestino tenue. Il fegato e la milza non sono ingranditi. Colon due punti cieco e sigmoideo morbido, indolore. La pressione sanguigna è ridotta. L'impulso non è congestionato, ma piuttosto c'è una tendenza alla bradicardia relativa. Non ci sono fenomeni meningei. Nel sangue periferico, all'inizio della malattia, può verificarsi una leucocitosi moderata, da 2 a 3 giorni di malattia c'è una tendenza alla leucopenia con una diminuzione del numero di pugnalate leucocitarie e un aumento del numero di linfociti e monociti, la VES non viene accelerata.

Nell'analisi di laboratorio delle urine, vi è una leggera albuminuria, una microembruria in rapido passaggio, un leggero aumento del numero dei leucociti e la comparsa di cilindri ialini è possibile. I cambiamenti nelle urine sono in accordo con la gravità della malattia e la disidratazione.

Esame microscopico delle feci Il numero di leucociti non supera 10-15 nel campo visivo, c'è una mescolanza di muco.

Rectoromanoscopicamente, è possibile evidenziare iperemia moderata della mucosa del retto e del colon sigmoideo senza cambiamenti focali.

La gastroenterite da rotavirus è divisa per gravità, che è determinata dall'intensità della diarrea e dalla disidratazione causata da esso, così come dalla gravità dell'intossicazione generale. Esistono tre gradi di gravità della gastroenterite da rotavirus: lieve, moderatamente pesante e meno spesso grave.

La diagnosi differenziale viene effettuata con salmonellosi, colera, dissenteria, tossicosi alimentari causate da microrganismi condizionatamente patogeni, persinosi e altre gastroenteriti virali.

La forma gastrointestinale della salmonellosi è caratterizzata dalla contemporanea malattia di persone che mangiano prodotti di scarsa qualità. Insorgenza tipicamente acuta: ipertermia, brividi gravi, vomito, forte dolore addominale, abbondanti feci fetide che mantengono il suo carattere fecale, leucocitosi neutrofila con uno spostamento della formula leucocitaria a sinistra. Quando la salmonellosi, non ci sono cambiamenti nella membrana mucosa della faringe, il fegato è generalmente ingrandito. L'isolamento dell'agente patogeno nell'esame batteriologico delle feci, del vomito o della lavanda gastrica risolve la diagnosi.

Secondo molti segni clinici di massa e rapidità della malattia, la gastroenterite da rotavirus può assomigliare al colera. Ma l'infezione da rotavirus si distingue per un decorso più mite, in particolare per il fatto che non sviluppa la condizione di algidi, così come la presenza di cambiamenti tipici nella membrana mucosa dell'orofaringe.

I più importanti sono i risultati della ricerca batteriologica nel caso del rilevamento del Vibrio cholerae. Una situazione simile si verifica con l'infezione da NAG.

La dissenteria batterica è caratterizzata da dolore addominale acuto, frequenti, a volte false, stimolanti, feci miste a muco e sangue, sigmoidite marcata, costante reazione febbrile, alterazioni patologiche nella sezione distale del colon secondo la rettoscopia. Tutti questi segni, così come i risultati della ricerca batteriologica, rendono relativamente facile la diagnosi differenziale per la forma della colite della dissenteria. Con la forma gastroenterica della dissenteria, il valore degli esami batteriologici aumenta drammaticamente.

La diagnostica differenziale della gastroenterite da rotavirus e delle tossicofonie alimentari causate da agenti patogeni opportunisti è particolarmente difficile, data la scarsa conoscenza del quadro clinico di queste malattie. In base al significato diagnostico degli studi di laboratorio, si dovrebbe dare la preferenza ai risultati positivi degli studi virologici e immunologici che confermano la natura del rotavirus della malattia, piuttosto che al rilevamento di batteri condizionatamente patogeni nelle feci del paziente.

Per la forma gastrointestinale della periniosi, è caratterizzata un inizio più graduale, la presenza, insieme alla gastroenterite, dei dolori muscolari e delle articolazioni; il fegato è generalmente ingrandito; le feci sono viscose a causa di una significativa mescolanza di muco e talvolta il sangue è possibile. Leucocitosi è nota nel sangue; Aumento della VES.

La sindrome gastroenterite può essere prominente in alcune malattie virali. Questi includono l'infezione adenovirale, che, oltre alle lesioni intestinali, è caratterizzata da congiuntivite, rinite, faringite, tonsillite, bronchite, polmonite, aumento dei linfonodi cervicali, fegato, milza, febbre prolungata.

Da enterite e gastroenterite, causata da enterovirus di Koksaki ed ECHO, la gastroenterite da rotavirus è caratterizzata da un quadro clinico monosindromico, in cui il danno intestinale occupa il primo posto. Al contrario, durante epidemie epidemiche di natura enterovirus, si nota la presenza di varie forme cliniche della malattia, la "multiformità" del quadro clinico, in cui i sintomi di danni alle membrane del cervello, della pelle e del tratto respiratorio superiore possono svolgere un ruolo significativo.

La diagnosi differenziale dell'infezione da rotavirus con colibacillosi nei bambini è più difficile e può essere basata sui seguenti criteri:

- maggiore insorgenza acuta dell'infezione da rotavirus rispetto alla colibacillosi, in particolare causata dalla colibacillosi enteropatogenica;

- recupero più rapido dall'infezione da rotavirus, anche nei bambini piccoli;

- maggiore frequenza della sindrome respiratoria in caso di infezione da rotavirus, ma minore severità e durata.

La più grande difficoltà è la diagnosi di infezioni batteriche da rotavirus miste, la cui proporzione nelle stagioni invernali dell'anno è piuttosto ampia (7 - 10% di tutte le OKI).

Una caratteristica della clinica delle infezioni miste è la presenza di complessi di sintomi caratteristici di entrambe le infezioni combinate: un aumento dei sintomi di intossicazione, la comparsa di segni di alterazioni infiammatorie nella mucosa dell'intestino tenue e crasso e un recupero più lento.

Il ricovero in ospedale di bambini e adulti con sospetta OCI causata da rotavirus viene effettuato in base a indicazioni cliniche (gravità della malattia) ed epidemiologiche (presenza di bambini deboli nell'ambiente del paziente, bambini del primo anno di vita, presenza di bambini in età prescolare, lavoratori dell'industria alimentare e persone equiparate a loro l'incapacità di rispettare il regime antiepidemico a casa, ecc.). I bambini di età inferiore a un anno con sintomi OCI gravi vengono ricoverati per primi. Il ricovero in ospedale separato di pazienti con sospetta gastroenterite da rotavirus e infezioni intestinali acute di diversa eziologia (reparti, scatole) è obbligatorio. Il principio del "riempimento unico" delle camere (scatole) deve essere rispettato.

Il trattamento dei pazienti con gastroenterite da rotavirus, tenendo conto delle idee esistenti sulla patogenesi di questa malattia, include un regime di risparmio e una compensazione per le violazioni dello stato funzionale dell'intestino, il ripristino dell'equilibrio idroelettrolitico e la disintossicazione del corpo.

Al momento del periodo acuto della malattia, viene prescritta una dieta 4-B, in cui vi è una forte restrizione dei carboidrati (fino a 200 g) e un aumento della quantità di proteine ​​(fino a 150 g) con una leggera diminuzione del contenuto calorico (2400 cal.). La quantità di zucchero è limitata a 40 g al giorno, verdura e frutta. Il latte è escluso. Il sale non è limitato.

Lo scopo di tali preparati digestivi multienzimatici domestici come oraz, solizim, somilasi, che nel trattamento di pazienti con gastroenterite da rotavirus non è inferiore all'importazione (panzinorm, digestal, festal, trienzyme, ecc.), È mostrato.

Il grado di disidratazione dell'organismo viene necessariamente valutato e la terapia viene condotta per reintegrare le perdite in eccesso di acqua e sali. Quando la disidratazione è I - II grado secondo V.I. Le soluzioni di glucosio-elettrolita sono somministrate per via orale a Pokrovsky (reidrossido di glucosio), tenendo conto della perdita di liquidi ed elettroliti, e dopo disidratazione dell'III grado è necessario iniziare il trattamento con la somministrazione endovenosa di soluzioni saline (trisolo, quartosolo, closolo, acesolo), ecc.

La tattica dell'introduzione delle soluzioni viene eseguita in accordo con i principi della terapia di reidratazione.

Al fine di stabilizzare la normale circolazione sanguigna e la disintossicazione, è possibile inserire soluzioni colloidali (gemodez, poliglucina, reopolyglukine).

Va sottolineato che la prescrizione di farmaci antibatterici, in assenza di concomitante infezione batterica, non è giustificata.

Si consiglia di utilizzare farmaci adsorbenti e astringenti.

Il trattamento dell'infezione da virus non è attualmente sviluppato.

L'estratto di convalescenti viene eseguito dopo una normalizzazione stabile (entro 2/3 giorni) delle feci e la scomparsa di tutti gli altri sintomi clinici della malattia sottostante in assenza di complicanze.

I bambini che frequentano le istituzioni prescolari, i lavoratori delle strutture alimentari e le persone a loro equiparate ricevono un esame virologico una tantum dopo la scomparsa dei sintomi clinici.

I rimanenti contingenti di pazienti non sono soggetti ad esami di laboratorio obbligatori.

6. Diagnosi di laboratorio

La diagnosi di laboratorio della gastroenterite da rotavirus non è attualmente difficile. Il rapido sviluppo della sindrome clinica e la degenza ospedaliera a breve termine dettano la necessità di utilizzare metodi rapidi per determinare l'eziologia della malattia. La maggior parte dei metodi diagnostici di laboratorio raccomandati in questo manuale consentono di rilevare i rotavirus durante il primo giorno. La scelta del metodo in ciascun caso è determinata dall'equipaggiamento tecnico del laboratorio, nonché dalla disponibilità di reagenti appropriati.

I metodi tradizionali di rilevamento dei cambiamenti sierologici nei sieri dei pazienti (reazione di neutralizzazione, inibizione dell'emoagglutinazione e fissazione del complemento) sono importanti nell'analisi retrospettiva della malattia. Pertanto, per la diagnosi sierologica precoce dell'infezione da rotavirus, si raccomanda la determinazione degli anticorpi della classe IgM.

L'oggetto dello studio virologico di una persona malata è solitamente feci. La presenza e la distribuzione di rotavirus nell'ambiente vengono rilevate esaminando campioni di suolo, cibo e acqua (acque reflue, acqua proveniente da bacini artificiali naturali e artificiali, acqua potabile).

6.1. Rilevazione di rotavirus in materiale clinico

e in campioni ambientali

6.1.1. Preparazione del campione per il test; campionatura

Quando si prelevano campioni per la ricerca virologica, vengono soddisfatti alcuni requisiti generali, adottando misure per proteggere il materiale dalla contaminazione. I campioni vengono prelevati solo in piatti sterili con un tappo di gomma denso, gesso adesivo rinforzato. Trasportare i campioni in contenitori con ghiaccio o refrigerante.

6.1.2. Preparazione alla sospensione, chiarimenti,

pulizia del campione, rimozione della flora batterica

La preparazione di campioni di feci per uno studio sul rotavirus comprende la preparazione di una sospensione al 10%, l'omogeneizzazione, la centrifugazione a 3000 giri al minuto. entro 30 minuti per rimuovere la flora batterica. Quando si esaminano oggetti dell'ambiente e prodotti alimentari, viene effettuata la pre-concentrazione del materiale studiato.

6.1.3. Concentrazione di particelle virali in campioni d'acqua

La concentrazione di rotavirus è una condizione importante per aumentare l'efficienza del loro rilevamento nei corpi idrici dell'ambiente.

Il metodo di concentrazione dei rotavirus utilizzando la cromatografia ad adsorbimento su silice porosa - vetro macroporoso (MPS) - è semplice e conveniente, utilizzando volumi d'acqua da 0,1 a 10 litri. Quando il campione viene passato attraverso il livello MPS, il virus viene sorbito sulla superficie del vetro. Per l'eluizione del virus utilizzando soluzioni che hanno la capacità di causare il desorbimento del virus. Il virus viene rimosso dal vetro con un piccolo volume di soluzione, che porta a una concentrazione da decine a centinaia di volte rispetto al campione originale.

Per migliorare le proprietà di adsorbimento, le preparazioni domestiche di vetro del marchio MPS-1000 VGH sono trattate come segue: una miscela (1: 1) di 3% di H O e 6 M di HCl viene preparata. Il vetro viene riempito con la miscela preparata alla velocità di 1 volume di vetro per 2 volumi della miscela. Far bollire in una cappa aspirante (senza tappo) per 1 ora, osservando le precauzioni di sicurezza. Lavare a pH neutro con acqua distillata. Secco a 100 ° C.

Colonna di vetro, pre-trattata con fluido siliconico, riempita di vetro (2 - 3 cc.), Imbevuta di acqua distillata. Al campione da analizzare (3 l) aggiungere 1 M di soluzione di MgCl ad una concentrazione finale di 0,05 M. L'acqua viene fatta passare attraverso la colonna ad una velocità di 150-500 ml / ora, regolando la portata mediante l'utilizzo di clip. Passare attraverso la colonna 10 ml di una soluzione di eluizione: estratto di carne 3%, pH 9,0; o brodo di trifosfato 1%, pH 9,0; o Tris HCl 0,1 M, contenente 2 M di NaCl, pH 11,0 (le soluzioni sono elencate in ordine decrescente delle proprietà di eluizione). Sorbate le frazioni con un volume di 1 ml, il pH nelle frazioni viene portato a un valore neutro.

6.2. Rilevazione di particelle virali mediante microscopia elettronica (EM) e microscopia a immunoelettrone (IEM)

Poiché il contenuto di particelle di rotavirus nelle feci di pazienti tipici è solitamente elevato nei primi 2-3 giorni di malattia, il metodo EM è ampiamente utilizzato per rilevare il rotavirus, che può essere utilizzato per rilevare particelle di rotavirus senza concentrazione aggiuntiva della sospensione fecale.

Per la preparazione dei farmaci, una goccia della sospensione del 10% studiata viene applicata su un piatto di cera dentale o carta oleata. In una goccia del substrato del film, si impone una griglia microscopica a soggetto. Dopo 1 - 3 minuti la griglia viene lavata su una goccia di acqua distillata e una soluzione di contrasto (soluzione al 2% di acido fosforotungico, regolata a pH 6,5 - 6,6 con 1 NKOH), il cui eccesso dopo 30 - 40 secondi. rimuovere la carta da filtro e la rete è asciugata. La visualizzazione dei preparati viene eseguita in un microscopio elettronico con un ingrandimento strumentale di 30 - 50000x.

I rotavirus sono facilmente rilevabili dall'esame EM delle sospensioni fecali in dimensioni e morfologia caratteristiche delle particelle virali. I rotavirus dovrebbero essere differenziati da varie particelle virali e formazioni simili a virus, particelle di batteriofago e flagelli batterici presenti nel materiale fecale.

L'uso della tecnologia IEM consente in alcuni casi non solo di aumentare la percentuale di rilevamento dei rotavirus, ma anche di dimostrare il loro ruolo etiologico. Per lo studio IEM, 0,1 ml di siero immune diluito 1: 5 di animali vengono miscelati con 0,4 ml di estratto fecale al 10%. La miscela viene incubata per 1 ora a temperatura ambiente, quindi per 12 ore a 4 ° C, dopo di che viene centrifugata per 90 minuti. a 15.000 giri / min Il supernatante viene drenato e il precipitato risultante viene risospeso in alcune gocce di acqua distillata, in contrasto con una soluzione al 2% di acido fosforotungstico (pH 6,5) e posto su griglie di oggetti; l'umidità in eccesso viene rimossa con carta da filtro. Lo studio dei farmaci viene effettuato in un microscopio elettronico con un ingrandimento strumentale di 50000x, esaminando almeno cinque celle della griglia in oggetto. In caso di risultato positivo, le particelle di rotavirus vengono rilevate in preparazioni sotto forma di cluster specifici (complessi immuni).

6.3. Rilevazione dell'antigene del rotavirus nel materiale di prova

6.3.1. Ottenere immunoreagenti

Sieri iperimmuni e specifiche immunoglobuline del rotavirus sono ottenute mediante immunizzazione di conigli, porcellini d'India, polli.

L'antigene per l'immunizzazione è stato preparato come segue: 5 mi di sospensione di coltura di rotavirus SA-II sono stati trattati con tripsina, aggiunti a fiasche per materassi da 1,5 litri con un monostrato di cellule eteroploidi del rene di scimmia verde 4647, incubate per 60 minuti a 37 ° C; aggiungere terreno di mantenimento privo di siero e incubare per 24-48 ore a 37 ° C. Tutta la biomassa è sottoposta a congelamento o sonicazione tripla, aggiungere PEG M da 6000 a 8-10% di concentrazione, lasciare per 20 ore a 4 ° C, quindi centrifugare a 10.000 giri al minuto. 2 ore Il pellet viene risospeso in PBS (da 1/30 a 1/50 del volume di biomassa). Dopo la pulizia con il freon 113, la fase acquosa viene utilizzata per immunizzare gli animali e come antigene negli studi immunologici. Concentrato in un volume di 1 ml contiene almeno 10 particelle virali.

Immunizzazione dei conigli: i conigli vengono iniettati per via endovenosa con 2 ml di preparazione del rotavirus nei giorni 1, 7, 35, 42 e il sangue viene prelevato il giorno 49 dopo l'inizio dell'immunizzazione. Nei giorni 1 e 35, l'antigene viene iniettato con un adiuvante completo aggiuntivo di Freund in diversi punti della schiena.

La frazione di immunoglobulina viene precipitata dal siero di coniglio iperimmune con una soluzione acquosa al 10% di polietilenglicole (PEG) con un peso molecolare di 6000. Il precipitato viene raccolto per centrifugazione, disciolto e dializzato contro il tampone di fosfato K da 0,01 M (pH-7.4) con 0:01 M Nace ( FSB). La concentrazione di immunoglobuline determinata spettrofotometricamente.

Immunizzazione di porcellini d'India: gli animali vengono iniettati per via intramuscolare con 0,5 ml di una preparazione di rotavirus concentrato con un pari volume di adiuvante completo di Freund a 1.14 e 28 ° giorno, prelievo di sangue due settimane dopo l'ultima immunizzazione.

Immunizzazione dei polli: polli di 20 settimane di galline ovaiole di razza bianca della razza Zarya-17 di Livorno sono immunizzati per via endovenosa a 1, 14, 28 giorni. Durante la prima immunizzazione, l'antigene viene somministrato addizionalmente per via intramuscolare in una miscela con un uguale volume di adiuvante completo di Freund. La quantità massima di anticorpi nel tuorlo viene osservata dopo la terza immunizzazione. I polli possono essere usati in modo permanente dopo la reimmunizzazione.

Isolamento delle immunoglobuline dei polli: il tuorlo viene separato dalla proteina nel guscio o dall'imbuto di Büchner e lavato con acqua di rubinetto. Il tuorlo (10 ml) viene trasferito in una provetta da centrifuga, aggiungere doppio volume (20 ml) di FSB e miscelare accuratamente. PEG 6000 viene applicato a una concentrazione del 3,5% (p / v) e miscelato per 10 minuti. a 14000 g. Il supernatante viene filtrato attraverso una carta da filtro in un cilindro graduato. Aggiungere ulteriore PEG 6000 ad una concentrazione finale del 12% e mescolare. Le immunoglobuline precipitate vengono raccolte per centrifugazione (10 minuti 14.000). Il precipitato viene sciolto in 5 ml di FSB (1/2 volume di tuorlo). La concentrazione di proteine ​​nel preparato è solitamente da 6 a 12 mg / ml.

6.3.2. Metodo di saggio immunoenzimatico (ELISA)

Il metodo di saggio immunoenzimatico (ELISA), basato sull'uso di anticorpi marcati con una molecola di enzima (perossidasi), è uno dei metodi più comuni ed efficaci e specifici per la rilevazione dell'antigene virale. Di solito usa il "sandwich" diretto e indiretto - opzioni. Marcatore enzimatico rilevato nella reazione di colore con il substrato. La variante diretta ELISA è più veloce di quella indiretta, ma è meno sensibile e specifica. Nella formulazione di una variante indiretta, viene utilizzato un coniugato commerciale anti-specifico di immunoglobuline con un enzima; Per evitare interazioni aspecifiche tra il coniugato e gli anticorpi sorbed sul pannello, è necessario avere sieri antivirali di due diverse specie animali.

Variante indiretta ELISA: 0,1 ml di immunoglobuline anti-thromtaun dal tuorlo delle uova di polli immunizzati a metà (48) dei pozzetti vengono introdotte nei pozzetti. Nell'altra metà, le immunoglobuline delle uova deposte prima dell'immunizzazione vengono introdotte come controllo negativo. L'assorbimento delle immunoglobuline viene effettuato da una soluzione con una concentrazione di 5 μg / ml in PBS durante la notte a 4 ° C. Il contenuto dei pozzetti viene drenato, i pozzetti vengono lavati con PBS-T e 0,1 ml del campione di prova vengono applicati in PBS-T con BSA 1% e EDTA 0,01 M ai pozzetti con antirotavirus e immunoglobuline normali e incubati per 1 ora a 37 ° C.

Dopo il lavaggio, 0,1 ml di siero anti-rotavirus di coniglio diluito a 1: 1000 - 1: 25000 viene aggiunto ai pozzetti nel tampone PBS-T. La diluizione ottimale del siero è determinata in esperimenti pre-impostati. I pannelli sono chiusi e incubati per 2 ore a 37 ° C. I pozzetti vengono lavati e 0,1 mi di una preparazione commerciale di anticorpi marcati con perossidasi contro IgG di coniglio ad una concentrazione da 1 a 2,5 mg / ml nel contenuto di perossidasi in PBSB-T-BSA viene aggiunto e incubato per 1 ora a 37 ° C. I pozzetti vengono lavati, aggiungere 0,1 ml di miscela di substrato appena preparata (O-fenilendiammina 0,5 mg / ml in 0,05 M Na-citrato tampone pH 5,0; HO - 0,03%. (Attenzione! Il lavoro richiede fare attenzione!)) e incubare a temperatura ambiente al buio per 30-40 minuti. La reazione enzimatica viene interrotta aggiungendo 0,05 ml di 3 M H SO. I risultati della reazione prendono in considerazione visivamente o spettrofotometricamente. I campioni sono considerati positivi, la cui densità ottica non è inferiore a 2 volte la densità ottica del controllo negativo.

6.3.3. Metodo di coagglutinazione

Questo metodo si basa sulla capacità della proteina A Staphylococcus aureus del ceppo Cowan di connettersi con il frammento Fc di IgG e, durante la formazione di uno specifico complesso antigene-anticorpo, causa il fenomeno di agglutinazione.

Per la formulazione della reazione di coagglutinazione, viene utilizzato un reagente stafilococco commerciale secco contenente la proteina A (Istituto di ricerca di elettrochimica Pasteur di Leningrado), che viene reidratato prima dell'uso in una soluzione allo 0,1% di blu di metilene.

In precedenza, ciascuna serie di siero iperimmune è stata testata per la presenza di anticorpi antistaphylococcal. Per fare questo, su un vetrino mescolare volumi uguali di siero con una diluizione di 1: 500 e il 10% di sospensione di stafilococco. Prendi in considerazione i risultati entro 5 minuti dalla formazione agglutinat. Per il lavoro di siero selezionato, che non contiene anticorpi antistaphylococcal a una diluizione di 1: 500. Per la preparazione di diagnosticum, 0,01 ml di siero anti-ratavirus diluito 1:10 con FSB sono mescolati con 0,5 ml di sospensione al 10% di stafilococco, mantenuti a temperatura ambiente per 1 ora, quindi si aggiungono 9,5 ml di FSB (diagnosticum). Allo stesso modo, lo stafilococco viene sensibilizzato con siero preimmunitario (reagente di controllo). I reagenti diagnostici e di controllo sono utilizzati nella reazione di PKA e TRKA.

Per mettere in scena la RCA nei pozzetti a forma di U del pannello, preparare 0,05 ml di PBS pH-7,4; in due pozzetti fare una microtitolazione o dispensatore Takacchi 0,05 ml di sospensione al 10% di feci e preparare diluizioni seriali doppie di 1: 2 - 1: 256. Ai pozzetti della prima fila aggiungere 0,05 ml di diagnosticum e ai pozzetti della seconda fila 0,05 ml di reagente di controllo. I pannelli sono coperti con un coperchio e incubati in un termostato a 37 ° C - 3 ore. In ogni esperimento, un campione di una sospensione di feci positiva e negativa per rotavirus, così come lisati di cellule infettate con il rotavirus SA-II, testate prima con microscopia elettronica.

Considerazione della reazione: i risultati sono considerati positivi quando viene rilevato un "ombrello" di agglutinazione insieme al diagnostico, con un risultato negativo o una diminuzione di 4 volte del titolo in parallelo con il reagente di controllo. I risultati sono considerati negativi quando i dischi si formano in entrambe le righe parallele. Per eliminare la coagglutinazione non specifica nelle file accoppiate, la sospensione delle feci viene adsorbita con un volume uguale di siero di coniglio normale a 37 ° C per 2 ore, seguito da riscaldamento a 80 ° C per 45 minuti. Quindi ri-sperimentare nella reazione di coagglutinazione.

6.3.4. Metodo di reazione in fase solida di coagglutinazione (TRKA)

Questo metodo di rilevazione degli antigeni del rotavirus si basa sui principi del metodo di immunodosaggio in fase solida (vedere 4.3.2). Tuttavia, a differenza di quest'ultimo, TRCA non utilizza l'enzima come etichetta, ma il reagente diagnostico e di controllo (vedere 4.3.3).

Per la stadiazione TRKA utilizzare pannelli immunologici con pozzetti a forma di U. Per la sensibilizzazione, 0,1 ml di siero iperimmune diluito con tampone bicarbonato di bicarbonato 0,01 M (pH 9,6) 1: 1000 viene aggiunto ai pozzetti. I pannelli di siero vengono lasciati per 2 o 3 ore a 37 ° C. Gli anticorpi non legati alla fase solida vengono rimossi lavando tre volte per 3 minuti. FSBT. Dopo di ciò, preparare 0,05 ml dei campioni studiati, oltre che ovviamente positivi e negativi (2 pozzetti per ciascun campione) nei pozzetti e lasciare per 2 ore a 37 ° C per formare complessi antigene-anticorpo. L'antigene non legato e le impurità correlate vengono rimossi dal triplo riciclaggio di PBS. Quindi, in un pozzetto aggiungere 0,05 ml di 0,5% di stafilococco diagnostico, nel secondo (controllo) 0,05 ml di sospensione allo 0,5% di stafilococco sensibilizzato con siero preimmune (vedere 4.4.3). L'incubazione viene effettuata per 1-2 ore a 37 ° C, seguita da una collocazione da 1 a 3 ore a 4 ° C o da 18 a 24 ore a 4 ° C. Il risultato della reazione di agglutinazione viene preso in considerazione visivamente: con una reazione positiva, i batteri agglutinati formano un ombrello; con una reazione negativa - i batteri si depositano completamente sotto forma di un disco.

6.3.5. Metodo di emoagglutinazione indiretta

In questo metodo, la rilevazione dell'antigene del rotavirus si basa sull'uso di un anticorpo eritrocitario diagnostico, che è un eritrocito di pecora sensibilizzato dal fluido di ascite immunoglobuline di ratti bianchi immunizzati con rotavirus SA-II.

Diluizioni doppie del 10% di sospensione fecale nei pozzetti del pannello sono testate con un diagnostico eritrocitario. L'agglutinazione degli eritrociti diagnostici indica la presenza dell'antigene del rotavirus nel campione. Una descrizione dettagliata della procedura per la formulazione di PHA è descritta nelle istruzioni allegate al kit di preparazione (Associazione di produzione scientifica "Rostepidkompleks", Rostov-on-Don).

Il kit Rotatest si basa sull'emoagglutinazione passiva inversa ed è progettato per rilevare il rotavirus nelle feci e per rilevare anticorpi contro il rotavirus nei sieri di sangue.

6.3.6. Metodo di rilevazione immunocitochimica del rotavirus

Il metodo si basa sulla determinazione immunochimica dell'antigene virale sintetizzato nelle cellule a seguito della loro infezione con un materiale contenente virus.

Il vantaggio del metodo rispetto all'ELISA è maggiore sensibilità, così come la capacità di determinare e quantificare l'infettività del campione di prova.

Messa in scena dell'esperimento: cellule trapiantate del rene di una scimmia verde ad una concentrazione da 3 a 10 cellule / ml formano 0,2 ml nei pozzetti dei pannelli a fondo piatto e incubano a 37 ° C (da 24 a 48 ore). Le cellule vengono quindi lavate con mezzo Eagle-MEM. Il materiale di prova viene diluito in mezzo Eagle-MEM, attivato per 1 ora a 37 ° C in presenza di 10 μg / ml di tripsina e aggiunto in 0,1 ml in almeno 4 pozzetti. I controlli positivi sono i pozzi in cui è stato inserito il materiale che è noto per contenere rotavirus. Controlli negativi: pozzetti con celle e pozzetti non infetti, in cui il materiale viene introdotto in modo simile al test, ma non contenente rotavirus. L'adsorbimento viene effettuato per 1 ora a 37 ° C, quindi il terreno viene rimosso, le cellule vengono lavate con mezzo Eagle-MEM. Aggiungere 0,2 ml di terreno Eagle-MEM con 1 μg / ml di tripsina nei pozzetti e incubare per 48 ore a 37 ° C.

Le cellule vengono lavate due volte con soluzione salina e fissate con acetone freddo (-20 °) all'85%, incubate per 2 ore a -20 °, quindi viene rimosso acetone. Il pannello viene lavato 3 volte con PBS contenente lo 0,05% di Tween 20 (PBS-T). 0,1 ml diluiti 1: 1000 in siero anti-rotavirus PBS-T con rabbia immunitaria è aggiunto ai pozzetti. Incubare per 2 ore a 37 ° C. Dopo aver lavato il pannello, 0,1 ml di un anticorpo di coniglio anti-IgG marcato con perossidasi (preparazione commerciale) viene aggiunto ai pozzetti in un pozzetto, a una concentrazione di 2 μg / ml dal contenuto di perossidasi in PBS con 1% BSA e incubato per 1,5 ore a 37 ° C.

Il pannello viene lavato 2 volte con PBS-T e 1 volta con tampone acetato 0,05 M, pH 5,0. 0,1 mi di una soluzione preparata di recente di substrato di perossidasi contenente 10 mi di tampone acetato / 4 mg di 3-ammino-9-etilcarbazolo (AEC) sciolti in 0,5 mi di acetone e 0,01 mi di perossido di idrogeno al 33% viene aggiunto ai pozzetti. (Attenzione! Lavorare con AEC richiede cautela). Incubare per 30-40 minuti. nel buio a temperatura ambiente. La reazione viene interrotta lavando il pannello con acqua distillata.

La contabilizzazione della reazione viene effettuata con un microscopio ottico con un piccolo ingrandimento. I pozzetti di controllo negativi non devono contenere cellule macchiate. I cluster locali di cellule colorate sono focolai di infezione virale.

6.3.7. Metodo di immunofluorescenza

Per identificare l'antigene del rotavirus usando l'immunofluorescenza, viene utilizzata una linea cellulare 4647. Le cellule vengono coltivate su vetrini coprioggetto o vetrini racchiusi in fiale o tubi di penicillina. La coltura infetta viene incubata a 37 ° C per 24-48 ore, dopo di che gli occhiali vengono rimossi dalle fiale, lavati in soluzione salina 0,15 M con l'aggiunta di tampone fosfato a pH 7,2, risciacquati con acqua distillata ed essiccati all'aria. Quindi i preparati sono fissati in due turni (10 minuti ciascuno) di acetone chimicamente puro raffreddato a 4 ° C.

I preparati sono trattati con un metodo indiretto in una camera umida. Una goccia di siero di coniglio immune rotavirus viene applicata alle cellule della coltura e incubata per 30 minuti. a 37 ° C, quindi i farmaci vengono lavati tre volte nell'FSB e rimuovere l'umidità in eccesso. I preparati umidi sono colorati con una miscela di volumi uguali di coniugato anti FITC e albumina bovina, etichettati con rodamina e incubati per 30 minuti. a 37 ° C. Dopo 3 volte il lavaggio nell'FSB, i preparati vengono asciugati all'aria. Per eliminare la fluorescenza non specifica, il siero antivirale viene adsorbito prima dell'uso con un omogenato di coltura cellulare normale e il coniugato FITC viene trattato con carbone attivo secondo i metodi standard.

I controlli seguenti sono utilizzati come controlli obbligatori: preparati di colture non infettate trattate in modo simile e preparati di colture infette trattate nel primo stadio di siero antivirale normale ed eterologo della stessa specie del siero immune a rotavirus.

Nel caso di risultati positivi, si osserva una distinta fluorescenza verde brillante nel citoplasma delle cellule.

6.4. Metodo elettroforootipizzante di rotavirus

Il metodo si basa sull'identificazione di rotavirus usando l'elettroforesi su gel di poliacrilammide di segmenti di RNA genomico virale. Il metodo consente la differenziazione dei ceppi di rotavirus sulla base delle differenze nella mobilità elettroforetica dei singoli segmenti di RNA di diversi isolati e pertanto è ampiamente utilizzato negli studi epidemiologici. Il metodo non richiede la pre-coltivazione di isolati, ha un'alta sensibilità e una specificità assoluta.

Il metodo è di particolare interesse per gli epidemiologi nello studio di malattie di gruppo di focolai di infezione da rotavirus.

Può essere effettuato sulla base di laboratori dotati di apparecchi per elettroforesi.

Per l'analisi sono sufficienti 0,2 - 0,5 ml di sospensione fecale 10-20%. Le sospensioni sono trattate con freon 113 e incubate con pronasi (0,2 mg / ml, 15 minuti) in presenza di sodio dodecil solfato (1%) e sodio etilendiamminotetraacetato (0,001 M). Dopo aver aggiunto sodio acetato (0,3 M), l'RNA viene deproteinizzato con una miscela di fenolo: cloroformio-isoamilico e precipitato con 2,5 volumi di etanolo (18 ore a -20 ° C o 2 ore a -70 ° C). Il precipitato viene raccolto per centrifugazione, sciolto in acqua e aggiunto tampone di dissociazione. L'elettroforesi viene effettuata secondo il metodo di Laemmli in piastre di gel al 10%. Il nitrato d'argento (0,011 M) viene solitamente usato per colorare l'RNA in un gel. Dopo la procedura di manifestazione nel gel, sono visibili 11 bande di RNA, corrispondenti al segmento genomico del rotavirus.

6.5. Determinazione dell'immunoglobulina di classe M nel siero

un paziente con infezione da rotavirus mediante il metodo della fase solida

reazioni di coagglutinazione (TRCA)

In questo caso, nella modifica viene utilizzato il principio della reazione di coagglutinazione in fase solida (vedere 4.3.4): per la sensibilizzazione dei pozzetti del pannello, utilizzare 0,1 ml di siero commerciale monospecifico di agnello contro IgM umana, ad una diluizione di 1: 1000. I pannelli vengono incubati per 2-4 ore a 37 ° C. Quindi i pozzetti vengono lavati con FSBT, riempiti con una soluzione di gelatina al 3% e lasciati per 30 minuti a 37 ° C. I pozzetti lavano l'FSBT e producono 0,05 ml dei sieri studiati, così come quelli deliberatamente positivi e negativi, diluiti 1: 100 FSBT (2 fori per ciascun siero). Quando si determina il titolo anticorpale, vengono esaminate le doppie diluizioni dei campioni testati (1:10 - 1: 1280). I pannelli sono incubati per 2 ore a 37 ° C e, dopo il lavaggio, 0,05 ml di reagente diagnostico e di controllo vengono introdotti nei pozzetti accoppiati. La reazione viene presa in considerazione dopo 1 - 2 ore (vedere sopra 4.3.4).

Lo stesso principio, modificato da TRCA, viene utilizzato per testare gli anticorpi IgA e IgG per l'infezione da rotavirus, nonché nell'analisi del colostro e del latte per le lattoglobuline.

Il metodo per determinare l'immunoglobulina di classe M nel siero del paziente viene utilizzato sia per la diagnosi precoce delle forme manifestate che per la loro diagnosi differenziale con forme asintomatiche di infezione da rotavirus.

7. Misure antiepidemiche

Ogni caso di infezione intestinale acuta causata da rotavirus, in particolare i bambini del primo anno di vita, così come i bambini che frequentano le istituzioni prescolari, necessita di un'attenta analisi epidemiologica per identificare la fonte, i principali modi e fattori di trasmissione ai fini dell'attuazione tempestiva delle misure antiepidemiche nello scoppio.

Misure volte a identificare e neutralizzare la fonte di infezione. Il rilevamento di pazienti sospettosi della malattia viene effettuato da medici di tutte le istituzioni sanitarie: durante visite ambulatoriali, visite a domicilio, visite mediche di bambini in istituti, ospedali, ecc. I pazienti identificati sono isolati dai gruppi di bambini. L'osservazione medica e il trattamento dei pazienti possono essere effettuati a casa o in ospedale. I bambini che frequentano le istituzioni per bambini dimessi dall'ospedale o che hanno completato un trattamento domiciliare con test di laboratorio negativi sono ammessi ai gruppi di bambini sulla base di un certificato di pediatra. I bambini che hanno avuto WG e continuano ad espellere i rotavirus (o antigene del rotavirus) con le feci senza manifestazioni cliniche di infezione possono essere ammessi alle scuole materne e all'asilo nido di asili nido-asili soggetti all'organizzazione di osservazione medica continua e ripetuti esami di laboratorio in 2 - 3 settimane dall'insorgere della malattia o dall'isolamento del virus.

L'esame epidemiologico dei focolai familiari di pazienti con FG viene effettuato con la malattia di bambini sotto i 2 anni di età e adulti dal numero di contingenti decretati. L'epidemiologo si reca presso l'istituzione dei bambini con un sondaggio se vi sono casi ripetuti di gastroenterite non batterica.

L'osservazione medica di bambini che comunicano con pazienti è effettuata tra cinque giorni dalla data di isolamento dell'ultima persona malata.

Le prove di laboratorio per rotavirus (antigene) di bambini e adulti che hanno comunicato con pazienti, sia in famiglia sia in gruppi organizzati, sono effettuati sulle istruzioni dell'infectiologist e dell'epidemiologo se ci sono indizi (l'evento nella famiglia o nella squadra da bambini di malattie ripetute OKI con una clinica simile), grave violazione del regime sanitario e igienico, la presenza nel focolaio di lavoratori di imprese alimentari e persone equiparate a loro, ecc.). L'esame di laboratorio obbligatorio è soggetto alla madre di un bambino malato nel primo anno di vita. Le persone in cui i rotavirus (antigene) sono presenti nelle feci sono sottoposte a un accurato esame clinico da parte di uno specialista in malattie infettive. In assenza di manifestazioni cliniche della malattia, i bambini e i dipendenti della squadra non sono isolati.

Dipendenti di imprese alimentari, servizi idrici, ecc. al momento dell'esame di ri-laboratorio e supervisione medica sono impiegati all'interno della struttura. L'esame di laboratorio ripetuto delle persone che espellono i rotavirus (antigene) con le feci, viene effettuato secondo la prescrizione dell'infectiologo e dell'epidemiologo con un intervallo di 5-7 giorni, utilizzando un esame di laboratorio completo.

Se le malattie di gruppo si verificano nelle istituzioni dei bambini, le misure di quarantena vengono effettuate entro 5 giorni dal momento dell'isolamento dell'ultimo paziente.

Le istituzioni conducono regolarmente lavori sanitari ed educativi volti a prevenire l'infezione da rotavirus.

Misure volte a rompere il meccanismo di trasmissione dell'infezione.

Gli studi hanno stabilito un effetto dannoso sui rotavirus a +70 ° C dopo 15 minuti; quando esposti a radiazioni ultraviolette, i rotavirus vengono anche inattivati ​​dopo 15 minuti.

In termini di resistenza all'azione di disinfettanti ampiamente utilizzati, i rotavirus sono vicini agli enterovirus e all'epatite A. Pertanto, nei centri di infezione da rotavirus e negli ospedali dove ci sono pazienti, è consigliabile eseguire misure di disinfezione secondo i regimi e utilizzando i mezzi raccomandati per l'epatite virale Infezioni da A e enterovirus (Appendice N 4 dell'Ordine del Ministero della Sanità dell'URSS N 752 del 07/08/81 e Ordine del Ministero della Salute dell'URSS N 916 dell'8 / 04/83). Particolare attenzione dovrebbe essere prestata alla corretta manipolazione delle mani delle persone che servono i bambini, nonché di capezzoli, giocattoli, piatti e altri oggetti per la cura del paziente.

Si raccomanda l'irradiazione ultravioletta regolare. Le radiazioni ultraviolette sono di solito effettuate utilizzando irradiatori - OBN-150 su 30 metri cubi. m sale, OBP-300 60 cu. m stanze e altri Avanzamenti non schermati impostati al ritmo di 1 - 1,5 W per 1 cu. m camere in assenza di persone (al fine di evitare danni agli occhi mucosi), schermato - al ritmo di 2 - 2,5 W per 1 cu. m, l'irradiazione può essere effettuata in presenza di persone. Tempo di disinfezione - 30 - 40 minuti. L'irradiazione aerea deve essere effettuata dopo aver pulito la stanza, cambiando la biancheria da letto e altri lavori relativi alla formazione di aerosol di polvere.

In reparti specializzati del personale ospedaliero dovrebbero indossare maschere respiratorie.

L'organizzazione di misure sanitarie e igieniche volte a prevenire l'infezione da rotavirus viene effettuata in conformità con le attuali istruzioni e raccomandazioni per altre infezioni con il meccanismo fecale-orale della diffusione del patogeno.

Una delle misure efficaci per prevenire l'infezione da rotavirus nei neonati è l'allattamento al seno.

La prevenzione specifica dell'infezione da rotavirus non viene eseguita.